1适用范围

　　适用于无尘车间沉降菌，浮游菌工作台面，工人手的微生物检测工作。

　　2定义

　　2.1浮游菌：悬浮在空气中的活的微生物粒子，使用专.用的仪器，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌活数。

　　2.2沉降菌：空气中的活的微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌活数。

　　2.3CFU：菌落形成单位colony-formingunit。

　　3测试方法

　　3.1试剂/培养基的配制

　　3.1.1根据采样数量，按规定要求配制好0.9%生理盐水和大豆酪蛋白琼脂培养基，将配制好的培养基分装到三角瓶中胶塞密封并用白纸包好；用移液管分装0.9%生理盐水10ml至试管中胶塞密封并用白纸包好，将相应数量移液管，棉拭子包好；将平皿放入不锈钢消.毒筒中，所有物品经121℃高压蒸气灭.菌15min；

　　3.1.2灭.菌结束后部分培养基倒平皿，将用于检测浮游菌、沉降菌，如非当日使用需在2~8℃低温保存。将部分培养基置于45±5℃的恒温水浴中，生理盐水管待冷却后可到无尘车间进行采样；

　　3.2沉降菌采样步骤如下：

　　3.2.1将培养基凝固了的培养皿按采样位置作好标记；

　　3.2.2布置采样点时，应尽量避开尘粒较集中的回风口；

　　3.2.3将培养皿放置在离地0.8～1.5m左右的工作台面上，揭开培养皿盖子，使培养基暴露在空气中采样30min；

　　3.2.4全部采样结束后，将培养皿盖上并倒置。

　　3.2.5培养皿在用于检测时，为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响，应同时进行阴性对照试验，每次或每个区域取1个对照皿，与采样皿同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的培养皿一起放入培养箱内培养，结果应无菌落生长。

　　3.3浮游菌采样步骤如下：

　　3.3.1采样前，先用消.毒剂消.毒采样器的顶盖，转盘及罩子的内外面；

　　3.3.2开启浮游菌采样器，使仪器中的残余消.毒剂蒸发，时间不少于5min，并检查流量并根据采样量调整设定采样参数，每个采样点采样不少于500L；

　　3.3.3布置采样点时，采样点位置应离地0.8～1.5m左右，送风口测点位置应离开送风面30cm左右；

　　3.3.4用消.毒剂对手进行消.毒后，将培养皿放入转盘内，盖上多孔取样头盖子，揭开保护盖，开启浮游菌采样器进行采样；

　　3.3.5采样结束后，对已采样的培养皿作上标记；

　　3.3.6全部采样结束后，用消.毒剂轻轻喷射仪器内罩子的内壁和转盘；

　　3.3.7培养皿在用于检测时，为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响，应同时进行阴性对照试验，每次或每个区域取1个对照皿，与采样皿同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的培养皿一起放入培养箱内培养，结果应无菌落生长。

　　3.4工人手微生物采样按以下步骤进行：

　　3.4.1将灭.菌生理盐水管作好标记；

　　3.4.2用消.毒剂对手进行消.毒，取出灭.菌棉拭子，打开灭.菌生理盐水管塞子，将棉拭子浸入灭.菌生理盐中，待棉拭子湿透后，在试管壁上轻压数下，除.去过多的水分；

　　3.4.3要求被检人五指并拢，将浸有灭.菌生理盐水的棉拭子在手上来回涂擦10次，将整个手掌面积涂抹到；

　　3.4.4将棉拭子与手接触的部份去掉，棉拭子头掉入灭.菌生理盐水管中，送检；

　　3.4.5每对一个采样点采样结束后，应用消.毒剂对手剪钳和手进行消.毒。

　　3.4.6采样结束后，另取一根棉拭子，将与手接触部分去掉，棉拭子头掉入灭.菌生理盐水管中作阴性对照。

　　3.5工作台面微生物采样按以下步骤进行：

　　3.5.1先将灭.菌生理盐水管标记好标记号，与所取的工人手相对应；

　　3.5.2实验员带上无菌手套，用消.毒剂将手，定位架进行消.毒，必要时用酒精灯烧灼定位架，加速酒精挥发；

　　3.5.3选定采样位置，固定好定位架；

　　3.5.4取出灭.菌棉拭子，打开灭.菌生理盐水管塞子，将棉拭子浸入灭.菌生理盐中，待棉拭子湿透后，在试管壁上轻压数下，去.除过多的水分；

　　3.5.5用棉拭子在定位架内来回涂抹10次；

　　3.5.6将棉拭子与手接触的部份去.除，棉拭子头掉入灭.菌生理盐水管中，送检；

　　3.5.7每一个采样点采样结束后，应用消.毒剂对手，定位架和剪钳进行消.毒。

　　采样结束后，另取一根棉拭子，将与手接触部分去.除，棉拭子头掉入灭.菌生理盐水管中作阴性对照。

　　3.6采样后的微生物检测

　　3.6.1以培养皿采样的，将培养皿倒置，于34±1℃培养24～48小时，计数；

　　以采样管采样的，将采样管在超声波清洗机超声5min，混匀后在洁净工作台上将已稀释成10倍数浓度的稀释液；用已灭.菌的移液管吸取1ml稀释液注入无菌平皿中，立即倾注培养基、混匀、凝固，每个稀释度倾注2块平板，倒置34±1℃培养24～48小时，计数；

　　3.7结果判定

　　3.7.1工作台面菌量应≦10cfu/cm2（即≦250cfu/25cm2）；

　　3.7.2工人手菌量应≦300cfu/hand；

　　3.7.3沉降菌数100000级应≦10个/皿；

　　浮游菌浓度100000级应≦500个/m3(≦125个/250L)；